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    語純生物(Nexell)大鼠血清工藝及應用

    發布時間:2022/3/25 12:30:19      閱讀次數:285

     大鼠血清采用健康大鼠血液為原料,經無菌采集、分離、微孔過濾后而成,性狀為澄清液體,無噬菌體、超低內毒素,無溶血無異物無細菌真菌支原體霉形體衣原體等,適用于試驗室或生化科研相關試驗,滿足不同科研實驗的多種需求。

    大鼠血清來源于非免疫的大鼠宿主,經過脂質萃取和含NaN3的PBS溶液透析,改善其透明度。推薦用PBS將封閉血清原液稀釋5-20倍,配成5%-20%的工作液,直接滴加在組織切片或者細胞涂片上,37℃度孵育10-30分鐘,清除血清,勿洗,滴加適當比例稀釋的一抗工作液,37℃孵育1-2h或4℃過夜。注意:封閉用血清中不能含有目標蛋白,且與一抗來源不同,可用與二抗相同來源的封閉血清。

    大鼠采血方式:

    1、剪尾采血:需血量較少時常用此法。先將動物固定,將鼠尾浸在50℃左右溫水中浸泡幾分鐘或用酒精棉球或二甲苯涂擦鼠尾,使尾部血管充盈,剪去尾尖1~2mm(小鼠)或3~5mm(大鼠),便血液順血管壁自由流入試管或用血紅蛋白吸管吸取。采血結束時,傷口消毒并用棉球壓迫止血。此法每只鼠一般可采血10次以上,小鼠每次可取血0.1mL左右,大鼠可取血0.3~0.5ml。

    2、眶后靜脈叢采血:操作者一手固定小鼠或大鼠,拇指和食指盡量將鼠頭部皮膚捏緊,或輕輕壓迫頸部兩側,使鼠眼球突出,眶后靜脈叢充血,另一只手持毛細采血管,以45°從內眼角刺入,并向下旋轉,感覺刺入靜脈叢后,再向外邊退邊吸,當得到所需血量后,放松加于頸部的壓力,并拔出采血器,以防穿刺孔出血。若技術熟練,此方法在短斯內可重復采血,小鼠一次可采血0.2~0.3ml,大鼠可采血約0.5ml。如只進行一次取血,可采用摘眼球法,右手取一眼科彎鑷,在鼠右或左側眼球根部將眼球摘去,并將鼠倒置;頭向下,抽取血液。

    大鼠血清是細胞培養中用量最大的天然培養基,含有豐富的細胞生長必須的營養成份,常用于動物細胞的體外培養,具有極為重要的功能。優點:血清中含有許多對細胞生長有利的成分,提供豐富的營養物質,促進細胞生長。缺點:血清的具體成分不明確,不容易控制變量;血清的保存期短,血清中可能含有易變物質;血清中可能含有病毒等生物,對實驗結果造成不良影響;使用血清成本較高。

    1.提供維持細胞指數生長的激素,基礎培養基中沒有或量很少的營養物,以及主要的低分子營養物。

    2.提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調變它們所結合的物質活力。

    3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到解毒作用。

    4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。

    5.起酸堿度緩沖液作用。

    6.提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。

    應用[7][8]

    大鼠血清主要用于原代細胞培養、傳代細胞培養及病毒疫苗的研制和生產。

    在大鼠大腦皮質神經元原代培養不同培養體系及純化方法的比較研究實驗中比較兩種大鼠大腦皮質神經元的培養及純化方法不同組合的優劣,探討科學可靠的神經元培養純化方法。

    方法:采用DMEM/F12+血清的有血清培養體系和神經基礎培養基(Neurobasal)+B27的無血清培養體系培養原代神經元。在接種3天后分別采用加入阿糖胞苷和5-氟脫氧尿嘧啶兩種方法進行神經元的純化。在1天、3天、7天采用形態學及7天時免疫熒光化學法鑒定神經元的純度及生長狀態。結果:1天、3天時,有血清培養體系和無血清體系中的神經元的形態結構和密度無明顯差別,在分別加入阿糖胞苷和5-氟脫氧尿嘧啶后,7天時無血清體系中加阿糖胞苷組細胞密度明顯低于其他三組細胞密度。通過免疫熒光化學法鑒定可見無血清體系中的神經元純度明顯高于有血清體系。

    結論:有血清體系的神經元純度較差,阿糖胞苷和5-氟脫氧尿嘧啶不能顯著抑制膠質細胞等雜細胞的生長。無血清培養體系加阿糖胞苷的神經元細胞受損較多,無血清培養體系加5-氟脫氧尿嘧啶純化培養的大鼠大腦皮質神經元,純度較高,細胞數量合適,是體外研究神經系統相關理論的良好模型。

    參考文獻

    [1]Optimized survival of hippocampal neurons in B27-supplemented Neurobasal,a new serum-free medium combination.Brewer GJ,Torricelli JR,Evege EK,et al.Journal de Neuroradiologie.1993

    [2]Cytoskeletal immunohistochemistry of central neurocytomas.Hessler R B,Lopes M B S,Frankfurter A,et al.American J Surgical Pathology.1992

    [3]Insulin Receptor-Protein Kinase C-Sig-naling Mediates Inhibition of Hypoxia-In-duced Necrosis of Cortical Neurons.Hamabe W,Fujita R,and Ueda Hetal.Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics.2005

    [4]Influence of ser-um-free mediumon the expression of glutamate transporters and the sus-ceptibility to glutamate toxicity in cultured cortical neurons.Velasco I,Velasco-Velazquez MA,Salazar P,et al.Journal of Neuroscience Research.2003

    [5]Are-liable method for culture of dissociated mouse cerebellar cells enriched for Purkinje neurons.Tabata T,Sawada S,Araki Ket al.Journal of Neuroscience Methods.2000

    [6]Modulation of Microtubule Dynamic Instability in vivo by Brain Microtubule Associated Proteins.Dhamodharan,R.,Wadsworth,P.Journal of Cell Science.1995

    [7]Roles of collagenases and other proteolytic enzymes in the dispersal of animal tissues.Kono T.Biochimica et Biophysica Acta.1969

    [8]張瑋,唐卉凌,王筠,李衛紅,侯金才,曹進,李澎濤.大鼠大腦皮質神經元原代培養不同培養體系及純化方法的比較研究[J].現代生物醫學進展,2010,10(06):1043-1046.

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