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    DH5α感受態是世界上常用的生物工程菌株之一

    發布時間:2021/7/23 9:39:11      閱讀次數:624

      DH5α感受態是世界上常用的生物工程菌株之一,特別是在克隆應用方面.本產品為克隆轉化專用的感受態大腸桿菌,該菌株經過特殊方法處理而獲得的高活性感受態細胞.使用pUC18(2.7kb)檢驗可獲得高達>10cfu/ug.可用于藍白斑篩選;recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高純度的質粒DNA的提;高轉化效率,高達8×10^9.
      DH5α感受態操作提示:
      ·剛剛化凍的細胞,轉化效率高.化凍后感受態細胞冰浴條件下,半小內活性無明顯變化,因此,同時轉化多支感受態細胞時盡量半小時加完目的DNA.
      ·感受態細胞應保存在-70℃,避免反復化凍,以避免降低感受態細胞的轉化效率.
      ·進行轉化操作時,應根據相應溫度及無菌條件的要求進行.
      ·避免用移液槍吹吸,整個過程要輕柔,且盡量低溫操作.
      ·為防止轉化實驗不成功,可以保留部分連接反應液,以重新轉化,將損失降低.
      DH5α感受態操作方法(以下操作均按無菌條件的標準進行):
      1.取感受態細胞室溫下使其解凍,解凍后立即置冰上;
      2.向感受態細胞中加入目的DNA(含量不超過50ng,體積不超過10ul),輕輕旋轉離心管以混勻,冰上放置30分鐘;
      3.將離心管置于42℃的水浴中放置60秒(時間需要準確控制).然后快速將離心管轉移到冰土,放置5分鐘;
      4.向管中加入1ml培養基(不含Amp),混勻后37℃水浴或振蕩培養小時,使細菌恢復正常生長狀態,并表達質粒編碼的抗生素抗性基因(Amp);
      5.將上述菌液涂布于含Amp的篩選平板上(也可經過離心收集后再涂板),正面向上放置半小時,待菌液完全被培養基吸收后倒置培養皿,37℃培養16-24小時.
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