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    BL21感受態細胞操作方法

    發布時間:2021/7/28 9:57:23      閱讀次數:655

       BL21感受態是采用大腸桿菌BL21(DE3)菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞,可用于DNA的化學轉化.使用pUC19質粒檢測,轉化效率可達107,-70℃保存幾個月轉化效率不發生改變.適合表達非毒性蛋白.該菌株是以T7RNA聚合酶為表達系統的外源基因蛋白高效表達的宿主.T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達受λ噬菌體DE3區的lacUV5啟動子調控,該區整合在BL21染色體上.本產品是大腸桿菌BL21(DE3)菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞,可用于DNA的熱擊轉化.使用pU19持粒檢測,轉化效率可達107。

      細胞能夠從周圍環境中攝取DNA分子,并且不易被細胞內的限制性核酸內切酶分解時所處的一種特殊生理狀態稱感受態.細菌的感受態有兩種類型:一種是自然感受態,自然感受態細菌可以自由地吸收DNA,通過它來進行遺傳轉化;另一種是人工感受態,在這種轉化中,細菌發生改變使得它們能攝入外源DNA。
      BL21感受態細胞操作方法:
      1.取100μl冰上融化的BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL感受態細胞,加入目的質粒并輕輕混勻,冰上靜置25分鐘,
      2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率,
      3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基(2YT或LB),混勻后37℃,200rpm復蘇60分鐘,
      4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上,
      5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。
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