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    透析胎牛血清其用途可歸納如下

    發布時間:2021/8/4 9:42:19      閱讀次數:547

       透析胎牛血清祛除了分子量在1萬以下的小分子,如葡萄糖 鹽 氨基酸 激素,等.透析過濾去除10KDa以下小分子,避免外源小分子對細胞同位素實驗 熒光素酶報告基因檢測或轉染細胞篩選產生干擾.它也是用于細胞培養,但同時,又有自己的一些特殊應用.其用途可歸納如下:

      細胞水平的藥物篩選
      例如:有人要從化合物庫中篩選S1P4受體的拮抗劑,以抑制流感病毒帶來的免疫激活導致的肺損傷.他采用報告基因進行監測.為了避免細胞培養環境中存在的小分子的干擾,他也需要用10%的透析胎牛血清加McCoy's 5A培養基來培養細胞.類似在藥物研發過程中,采用特定啟動子操縱的熒光素酶報告基因,基于細胞平臺的高通量藥物篩選,也都需要無外源小分子的培養體系.
      細胞克隆的篩選
      包括雜交瘤細胞和CHO細胞等,由于在進行細胞篩選時,需要無外源小分子如次黃嘌呤和胸腺嘧啶等的干擾,因此也需要用到透析胎牛血清.
      有人研究呼吸道合胞病毒的宿主特異性:即為什么它只感染呼吸道上皮細胞,而不感染其他細胞.
      他們將該病毒的F蛋白(融合蛋白)序列克隆入質粒內,并轉染293T細胞.轉染后第20小時,細胞先在不含蛋氨酸和半胱氨酸的DMEM+透析胎牛血清中培養了45分鐘(讓細胞處于饑餓狀態,因培養基中缺少氨基酸),再在同樣上述培養基中培養,但添加了35S標記的蛋氨酸和半胱氨酸.
      培養4小時后進行分析.即裂解細胞后,用抗F蛋白的抗體捕獲F蛋白 跑膠并進行放射自顯影,分析F蛋白的表達情況.發現F蛋白的表達確實增加了,但突變后的F蛋白表達卻無任何變化.結果證實,野生型的F蛋白確實參與病毒對宿主細胞的侵襲.
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