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    套管給藥實驗操作方法

    發布時間:2021/8/6 22:37:01      閱讀次數:479

     在腦科學基礎研究領域中,顱腦給藥已經成為大多數動物實驗的重要環節.根據實驗設計,常見有三種給藥方式:單次注射給藥 多次反復給藥和持續釋放給藥.前者通常采用立體定位儀配合微量注射泵給藥,第二種通常采用套管給藥,第三種通常通過植入式緩釋泵給藥.

    本文主要介紹套管給藥,它主要用于給小鼠 大鼠 猴等實驗動物的目標腦區進行反復多次給藥,也可結合配套光纖使用(光遺傳),在給藥的同時或者給藥后繼續對目標腦區進行光刺激.常應用于人類神經性疾病動物模型 高級腦功能 情感 認知等相關研究.

    1.儀器設備與配件

    腦立體定位儀 顯微鏡 冷光源 保溫墊 手術墊 套管夾持器 手術器械包 酒精棉球 干棉球 顱鉆(包括鉆頭) 異氟烷氣體麻醉系統(或注射麻醉藥品) 套管給藥系統(導管 注射內管 導管帽 PE管 小螺釘) 微量給藥系統(微量注射泵 微量注射器)

    大小鼠剃毛器(非必須,可手術剪去毛) 快速滅菌器(主要用于手術器械消毒,避免引起小鼠顱內炎癥) 顱骨水平校準器(非必須,主要降低實驗上手操作難度) 顱鉆夾持器(非必須,可手持顱鉆鉆孔替代)

    2.試劑

    碘伏 酒精 雙氧水 生理鹽水 牙科水泥(牙托水和牙托粉) 抗生素 異氟烷(或注射用麻醉藥物)

    3.操作步驟

    1根據腦圖譜或文獻確定目標腦區的三維坐標:AP 值(Anterior-Posterior,Y 軸,頭部到尾部) ML 值(Medial-Lateral,X 軸,中縫到兩側)和 DV 值(Dorsal Ventral,Z 軸,背側到腹側).

    2將動物麻醉,頭部固定到腦立體定位儀上(小鼠需要黑色適配器,大鼠無需適配器,直接固定即可).調平顱骨,而后定位至目標腦區利用顱鉆鉆孔(同時在孔位附近鉆 2-3 個小孔,用于旋入顱釘,作為牙科水泥著力點,防止牙科水泥脫落.同時這些小孔直徑需要小于顱釘,這樣顱釘才能旋緊,起到提供附著力效果),然后用針輕微刺破目標腦區上方孔德硬腦膜,暴露顱腦;顱釘固定位置硬腦膜無需刺破.將顱釘旋入孔內約三圈,然后將準備好的導管,通過夾持器緩慢植入顱內,再用牙科水泥將螺絲和導管包裹固定.

    3等待牙科水泥凝固后(約 15 分鐘左右),移除夾持器(注意不要帶動導管),并且緩慢插入導管帽,旋緊;根據實際情況判斷是否需要縫合皮膚.

    4動物恢復期,約 2-3 天即可恢復.在此期間,可在皮膚周圍涂抹羅紅霉素軟膏,防止動物發炎感染;同時注意動物狀態,適時腹腔注射補充糖鹽,使得動物獲得足夠多能量.

    5將注射內管 PE 管 鎖緊螺帽 注射器提前組裝好.利用注射泵吸取藥物,在PE管上標注藥液位置(主要用于注射藥物過程中觀察藥物液面是否下降了).隨后取出導管帽,將注射內管緩慢插入導管,利用鎖緊螺帽鎖緊.

    6設置注射泵的注射量 注射速度,開始注射.注射完畢后,靜止約 10 分鐘,待藥物被充分擴散,然后緩慢拔出注射內管,重新插入導管帽,旋緊.

     

    4.注意事項

    1.除金屬導管帽外,建議對非金屬導管帽 導管 注射內管 導管帽芯 鎖緊螺帽和 PE 管均可以采用高壓蒸汽 紫外 環氧乙烷等方式進行消毒滅菌.

    2.使用 PE 管前,可以用大頭針將 PE 管的一端接頭撐大一點或者用酒精泡一小會,便于插入注射內管.插入注射內管時,務必注意的是,PE 管必須套在白色層外層(非金屬管外層),否則易脫落 松動,導致漏液;

    3.因 PE 管 注射內管內部存在死體積,因此在將注射內管 PE 管 鎖緊螺帽 注射器組裝好以后,插入導管前,應將注射液(比如藥物)將 PE 管和注射內管充滿,勿出現氣泡,以保證注射藥量的精準.操作方法:需要先向前推注射器,直至注射內管前端有液體冒出,才可將注射內針插入導管,注射藥物.

     

    5.套管選擇

    (1)單管

    訂貨時,務必提前確認以下 4 個參數:

    1)D-導管的外徑,有 0.64 0.56 0.48 0.41 和 0.71 mm 五種規格供選擇.

    2)C-導管塑料基座 (B) 基座以下金屬管的長度,即動物顱骨表面至目標腦區的垂直距離(單位:mm).

    3)G1-注射內管插入導管后突出部分的長度(單位:mm),一般選擇 0.5 或者 1.0 mm.

    4)G2-導管帽插入導管后突出部分的長度(單位:mm),一般選擇 0 0.5 或者 1.0 mm.

    (2)雙管

    訂貨時,務必提前確認以下 5 個參數:

    1)D-導管的外徑,有 0.64 0.48 和 0.41 mm 三種規格供選擇.

    2)C-導管塑料基座 (B) 下金屬管的長度,即動物顱骨表面至目標腦區的垂直距離(單位:mm).

    3)G1-注射內管插入導管后突出部分的長度(單位:mm),一般選擇 0.5 或者 1.0 mm.

    4)G2-導管帽插入導管后突出部分的長度(單位:mm),一般選擇 0.5 或者 1.0 mm.

    5)C.C-雙導管的中心間距,即兩個目標腦區的水平間距(單位:mm).

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