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    植物凝脂酸(PA )ELISA試劑盒

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     包裝規格48T/96T

    檢測方法:酶聯免疫

    檢測標本:血清、血漿、尿液、組織勻漿等

    本試劑盒僅供科研使用!

    試劑盒組成

     

              

    96孔配置

    12孔×8

    48孔配置

    12孔×4

      

     1

    標準品(500ng/ml)

    0.5ml

    0.5ml

    稀釋即用型

     2 

    酶標包被板

    1

    1

    已包被即用型

     3

    標準品稀釋液

    3ml

    3ml

    即用型

     4

    鏈霉親和素-HRP

    6ml

    3ml

    即用型

     5

    30x倍濃縮洗滌液

    20ml

    20ml

    蒸餾水稀釋

     6

    生物素標記抗體

    2ml

    2ml

    即用型

     7

    顯色劑A

    6ml

    3ml

    即用型

     8

    顯色劑B

    6ml

    3ml

    即用型

     9

    終止液

    6ml

    3ml

    即用型

    10

    說明書

    1

    1

    即用型

    11

    封板膜

    2

    2

    不可反復使用

    12

    密封袋

    1

    1

    即用型

    需要而未提供的試劑和器材

    1.   酶標儀(450nm檢測波長濾光片,570nm630nm校正波長濾光片。

    2.   洗板機(可調注液量,保證每孔洗液加至0.35ml而不溢出)。

    3.   超凈工作臺,生物安全柜,通風柜。

    4.   高精度單道加液器(量程為0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).

    5.   高精度多道加液器(8道或12道,量程為50-300μl).

    6.   37℃恒溫箱。

    7.   低溫離心機。

    8.   電冰箱(4,-20,-86℃).

    9.漩渦混合儀,低頻振蕩器等

    注意事項

    1 2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

    2 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

    3 為避免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。

    4 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

    5 底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

    6. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸,使用時必須注意安全。

    7. 各步驟加樣均應使用加樣器,并經常校準其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

    8. 每次試驗測定的同時做標準曲線,。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔最高濃度的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n)。

    9. 配制試劑時,要用旋渦混合儀混勻。加入孔內的試劑,充分混勻對測試結果尤為重要,最好使用微量振蕩器(使用最低頻率),如無微量振蕩器,可在反應前手工輕輕晃動酶標板1分鐘,例如做圓周動作,使加入孔中的反應液混勻。

    10. 實驗用酶標儀應嚴格按使用說明書規范操作,并在使用前充分預熱。

    11. 手工洗板應注意:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

     

    樣本要求

    1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

    2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存或根據存放,時間做相應溫度調整,但應避免反復凍融,(由于樣本種類過多,每個單位處理方式不一樣,本說明書不做詳細介紹)。

     

    操作程序

    1 標準品的稀釋:(本試劑系統提供原倍標準品一支,用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋)按下表格執行:

     250ng/ml

    5號標準品)

    120μl的原倍標準品加入120μl的標準品稀釋液

     125ng/ml

    4號標準品)

    120μl5號標準品加入120μl的標準品稀釋液

       62.5ng/ml

    3號標準品)

    120μl4號標準品加入120μl的標準品稀釋液

      31.2ng/ml

    2號標準品)

    120μl3號標準品加入120μl的標準品稀釋液

      15.6ng/ml

    1號標準品)

    120μl2號標準品加入120μl的標準品稀釋液

     

    2 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

    3 加樣:(詳細操作流程請聯系客服索要說明書

    4 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋備用。

    5 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

    6 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。

    7 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

    8 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后10分鐘以內進行。

     

    結果判斷

    1.每個標準品和標本的OD值應減去零孔的OD值。(若不減零孔值,標準曲線的零孔應相交于Y軸)

    2.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種熟悉應用軟件來計算。

    3.手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標,OD值作縱坐標,以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。推薦使用專業制作曲線軟件進行分析計算結果。

    4.若標本OD值高于標準曲線上限,應適當稀釋后重測,計算濃度時應乘以稀釋倍數。

     

     

     

     

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